今天和大家分享一篇通过亲和纯化串联质谱分析（AP-MS）探究克里米亚-刚果出血热病毒(CCHFV)糖蛋白Gn/Gc和宿主的相互作用的客户文章。文章鉴定了45种宿主蛋白作为高可信度的Gn/Gc相互作用蛋白，建立了关键病毒分子的宿主相互作用机制全景图。此外，作者通过体内和体外等一系列分子实验阐明了代表性细胞蛋白HAX1对病毒包装和传播的抑制活性，为进一步确定CCHGV病毒的潜在治疗靶点提供了线索。这篇文章于2023年3月发表在Nature Communications（IF=14.7）杂志上，标题为“Interactome profiling of Crimean-Congo hemorrhagic fever virus glycoproteins”，由我司韩强强博士、刘宜子以及刘通提供质谱技术支持。

本研究使用Strep标签标记的Gn/Gc进行亲和纯化（AP）后的beads样本，以及空载质粒AP的beads样本，每组设置4个重复。实验细胞模型包括人胚胎肾293T（HEK293T）细胞和Huh7细胞（CCHFV病毒的另一种细胞模型）。此外。通过CRISPR-Cas9基因编辑技术构建了HAX1敲除的HEK293T细胞系，并建立了HAX1敲低的C57BL/6小鼠模型。

CC富集分析表明，45个Gn/Gc相互作用蛋白主要富集于膜相关蛋白，如细胞器膜、线粒体、ER、细胞外泌体和细胞质小泡等。BP分析显示，这些互作蛋白主要富集在跨膜转运和ATP代谢等生物过程。此外，参与蛋白质折叠和蛋白质结合过程的分子也在GO条目显著富集，暗示了这些蛋白质在CCHFV糖蛋白生理学中的作用。

通过STRING分析，鉴定出97种高可信度的蛋白质相互作用关系。基于相互作用数量的核心网络算法，发现两个显著的子网络，这些“核心”网络富集在线粒体、内质网和细胞骨架，表明这些宿主因子可能在GP-宿主相互作用网络中发挥关键作用。

基于GO和相互作用网络分析，研究者将宿主蛋白映射到CCHFV的生命周期，绘制了CCHFV Gn/Gc与宿主细胞相互作用的潜在全局视图。通过这些主动或被动的相互作用，病毒蛋白可能调节细胞因子或受细胞因子调节，以促进病毒感染和致病性，或触发宿主的抗病毒防御机制，值得进一步研究。

CHFV Gn定位到高尔基体对于病毒包装是必要的。研究者进一步研究了HAX1是否干扰Gn的高尔基体定位。高尔基体标记物（B4GALT1）的有效共定位表明，在没有HAX1过表达的情况下，Gn表现出明显的高尔基体分布；而在共表达HAX1的细胞中，Gn的定位模式明显从高尔基体斑块转变为分散的细胞质分布。线粒体标记物（MitoTracker）的共定位实验表明，Gn确实被HAX1显着重新定位到线粒体上。这些发现表明，通过蛋白质相互作用，HAX1可以将病毒包膜蛋白（尤其是Gn）隔离到线粒体，从而破坏高效病毒粒子包装所需的病毒蛋白的正确高尔基体定位。

本研究基于AP-MS/MS技术，全面评估了CCHFV Gn/Gc相互作用的宿主因子，并建立了关键病毒分子的相互作用机制。这些相互作用分析揭示了CCHFV糖蛋白在病毒生命周期中的广泛宿主相互作用，并可能为抗病毒药物的合理设计提供潜在靶点。此外，通过体外和体内实验，详细描述了HAX1的功能和机制。HAX1通过其C端与Gn的相互作用和N端对线粒体的靶向性，将Gn分隔到线粒体，从而减弱病毒糖蛋白介导的高尔基体包装，减少子代病毒的增殖，发挥抗CCHFV的宿主限制因子作用。这些发现提出了一种意想不到的HAX1/线粒体相关宿主抗病毒策略，也反映了本研究中基于质谱相互作用组的价值。